1．取96孔細胞培養(yǎng)板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時讓細胞帖壁（如果是懸浮細胞可直接進行下一步）

2．用RPMI-1640培養(yǎng)液2～10倍遞次稀釋細胞因子標準品，根據(jù)情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標準品和待檢樣品，每個稀釋度3個重復(fù)孔。對照孔6個：3個陽性對照孔，每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個陰性對照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培養(yǎng)液。在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48小時或預(yù)定的時間。

3．吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細胞，應(yīng)在吸去上清液前離心培養(yǎng)板）。

4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6小時。

5．每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇，在振蕩器上振蕩混勻，讓還原產(chǎn)物充分溶解。置酶聯(lián)檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長570nm，參考波長630nm。以O(shè)D值對樣品稀釋度作圖，比較標準曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。