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用異硫氰酸胍和有機(jī)溶劑提取RNA

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-04-26

 

  收集細(xì)胞,離心5000r/min ,5分鐘,棄上清,加入異硫氰酸胍變性液(異硫氰酸胍4mol/L;檸檬酸鈉25mmol/L,Sarkosy10.5%,β-巰基乙醇0.1mol/L)500ml,混勻,振蕩10秒,加2 mol/L醋酸鈉50ml,水飽和酚500m l和氯仿/異戊醇(49:1)100m l顛倒混合數(shù)秒鐘,冰浴15分鐘,4℃離心10,000 r/min,15分鐘,吸取上清,加入等體積異丙醇或2倍體積無(wú)水乙醇,4℃離心10,000 r/min,10分鐘,棄上清,70%酒精洗滌一次,抽干,加35mlDEPC處理水溶解,取5ml經(jīng)稀釋后紫外測(cè)定RNA提取量,其余30ml分裝,-20℃保存?zhèn)溆谩?BR>

 
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